| |||
|
| Биофизический механизм флуоресценции |
|
Первичным актом запасания энергии при фотосинтезе является поглощение света молекулами пигментов. При этом молекула переходит из основного (невозбужденного) в возбужденное состояние (S*). По существу, это означает переброс одного из двух p-электронов с низкой энергетической орбиты на более высокую без изменения спина. Наличие в спектре поглощения хлорофилла двух главных пиков говорит о том, что существует два наиболее вероятных для данной молекулы синглетных уровня: более высокий (S*2) при поглощении синего света и более низкий (S*1) при поглощении красного.
Каждый поглощенный молекулой хлорофилла квант красного света переводит электрон из основного состояния в возбужденное, причем вся энергия кванта поглощается в этом процессе электроном. Поглощение кванта синего света переводит электрон в еще более возбужденное состояние, однако, попав на более высокий энергетический уровень, электрон тотчас же падает обратно на «красную» орбиту, причем слишком быстро, чтобы совершить при этом какую-либо полезную химическую работу . Одним из путей дезактивации возбуждения является эмиссия света, называемая флуоресценцией. Она представляет собой энергию, испускаемую в виде электромагнитного излучения при переходе молекулы возбужденного синглетного состояния в основное. Время жизни при флуоресценции для большинства органических молекул лежит в пределах от 10-9 до 10-6 с. [16]. Так как флуоресценция является следствием перехода с нижнего энергетического уровня и подуровня, то спектр флуоресценции практически не зависит от длины волны возбуждающего света и всегда смещен в более длинноволновую область по отношению к красному пику поглощения. |
| Поглощение света пигментами |
|
В живых растениях (in situ) первоначально свет поглощается пигментами, входящими в крупные пигмент-белковые комплексы: светособирающий комплекс (ССК) и комплексы фотосистем 2 и 1 (ФС-2, ФС-1). Основная функция ССК - „светосбор" и передача поглощенной энергии на комплексы ФС-2 и ФС-1. Последние наряду с функцией светосбора за счет набора пигментов в антенной части комплекса обеспечивают с участием соответствующих реакционных центров Р680 и Р700 первичный акт разделения заряда, являющегося начальным этапом трансформации световой энергии в энергию химических связей первичных продуктов фотосинтеза.
Поглощенная светособирающим комплексом и антеннами ФС-2 и ФС-1 световая энергия распределяется по трем основным каналам: температурная дезактивация, быстрая флуоресценция и фотохимические реакции. Высокая скорость фотохимических реакций при малом числе реакционных центров (1—3 % от общего хлорофилла а) обеспечивается системой „фокусировки" (внутри- и межкомплексная миграция энергии), за счет которой диффузионный поглощенный свет концентрируется в реакционные центры ФС-2 и ФС-1. Строго направленный поток энергии от пигментов-сборщиков в реакционные центры осуществляется за счет реализации общего принципа: передача энергии идет от коротковолновых форм пигментов к длинноволновым (в пределах комплекса) и от комплексов с коротковолновыми к комплексам с длинноволновыми формами пигментов. Межкомплексная передача энергии является, по-видимому, одним из основных лимитирующих и, следовательно, активно регулируемым звеном в общей системе регуляции фотосинтеза. Поэтому не случайно при изучении систем регуляции выхода флуоресценции особое внимание уделяется межкомплексному взаимодействию. Эффективность межпигментной и межкомплексной передачи энергии зависит от природы пигментов, структурной организации фотосинтетического аппарата, условий среды. Высокая эффективность миграции энергии, структура энергетических уровней каротиноидов и ксантофиллов приводят к тому, что при обычных условиях окружающей среды дополнительные пигменты, за исключением фикобилипротеинов, в естественных системах не флуоресцируют. Способностью к флуоресценции обладают молекулы хлорофилла а, входящие в состав ССК антенны ФСII (максимум флуоресценции на волне 665 нм). |
| Особенности флуоресцентции пигментов |
|
Свойство хлорофилла a и его предшественников к флуоресцентной эмиссии позволяет идентифицировать эти зеленые пигменты и охарактеризовать их в комплексной среде. Флуоресцентный метод может существенно помочь в определении и быстрой характеристике флуоресцирующих пигментов (таких, как хлорофиллы) среди нефлуоресцирующих (каротиноиды) без какого-либо разделения на компоненты. Флуоресценция также испускается фикоцианинами и фикоэритринами. Очень слабая флуоресценция была приписана каротиноидам in vitro.
Молекула пигмента, для излучения максимального сигнала флуоресценции, полностью возбуждена излучением, которое поглощается в наибольшей степени: хлорофиллы, которые имеют две полосы поглощения, обычно облучались синим светом (так как возбуждение красной областью спектра будет смешиваться со слишком близкими полосами эмиссии). Интенсивность флуоресценции определяется температурой , pH и находится под значительным влиянием процессов траспорта энергии и примесей, особенно неорганических ионов. |
| Дальше... |
